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裂谷熱病毒ELISA檢測試劑盒（酶聯免疫法）

廣州健侖生物科技有限公司

裂谷熱（RVF）是由裂谷熱病毒引起的，經蚊類媒介或接觸傳播的急性病毒性人畜共患病，主要影響的是動物，但也能傳染人。初始的癥狀有：發(fā)熱、頭痛、疲勞、關節(jié)和肌肉疼痛，有時會有惡心、嘔吐，部分患者會出現結膜炎及畏光的現象；嚴重者可能會導致出血、休克、腦炎或肝炎，甚至是死亡。

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（2）著絲粒（centromere，CEN）：有絲分裂過程中紡錘絲的結合位點，使染色體在分裂過程中能正確分配到子細胞中。在YAC中起到保證一個細胞內只有一個人工染色體的作用。如pYAC4使用的是酵母第四條染色體的著絲粒。

（3）自主復制序列（autonomously replication sequences，ARS）：一段特殊的序列，含有酵母菌中DNA進行雙向復制所必須的信號。

（4）標記基因。YAC載體的選擇標記主要采用營養(yǎng)缺陷型基因，如色氨酸、亮氨酸和組氨酸合成缺陷型基因trp1、leu2和his3、尿嘧啶合成缺陷型基因ura3等，以及赭石突變抑制基因sup4。與YAC載體配套工作的宿主酵母菌（如AB1380）的胸腺嘧啶合成基因帶有一個赭石突變ade 2-1。帶有這個突變的酵母菌在基礎培養(yǎng)基上形成紅色菌落，當帶有赭石突變抑制基因sup4的載體存在于細胞中時，可抑制ade 2-1基因的突變效應，形成正常的白色菌落。利用這一菌落顏色轉變的現象，可用于篩選載體中含有外源DNA片段插入的重組子。

三、YAC載體的工作原理

YAC 在結構上能模擬酵母染色體的線狀DNA分子。將大片段的基因組DNA連接到YAC載體的兩個“臂”上，然后將連接產物通過轉化的方法導入酵母菌，這樣就構成了重組的YAC。每一條臂分子中都攜帶一個選擇標記以及按適當方向排列的起端粒作用的DNA序列。另外，其中一條臂上還攜帶著絲粒DNA序列以及復制子序列。因此在重組的YAC中，外源基因組DNA片段的一側為著絲粒、復制子及選擇標記，另一側為第二種選擇標記。通過在選擇性瓊脂平板上生長的菌落可鑒定出已轉化并穩(wěn)定保持人工染色體的酵母轉化子。

在 YAC載體中常用的是pYAC4。由于酵母的染色體是線狀的，因此其在工作狀態(tài)也是線狀的。但是，為了方便制備YAC載體，YAC載體以環(huán)狀的方式存在，并增加了普通大腸桿菌質粒載體的復制元件和選擇標記，以便保存和增殖。

YAC載體主要是用來構建大片段DNA文庫，特別用來構建高等真核生物的基因組文庫，并不用作常規(guī)的基因克隆。下圖是以pYAC4為例如，當用BamHI切割成線狀后，就形成了一個微型酵母染色體，包含染色體復制的必要順式元件，如自主復制序列、著絲粒和位于兩端的端粒。對于BamHI切割后形成的微型酵母染色體，當用EcoRI或SmaI切割抑制基因sup4內部的位點后形成染色體的兩條臂，與外源大片段DNA在該切點相連就形成一個大型人工酵母染色體，通過轉化進入到酵母菌后可象染色體一樣復制，并隨細胞分裂分配到子細胞中去，達到克隆大片段DNA的目的。

酵母人工染色體（yeast artificial chromosome，YAC）

裝載了外源DNA片段的重組子導致抑制基因sup4插入失活，從而形成紅色菌落；而載體自身連接后轉入到酵母細胞后形成白色菌落。這些紅色的裝載了不同外源DNA片段的重組酵母菌菌落的群體就構成了YAC文庫。

四、YA載體的優(yōu)缺點

YAC載體雖然功能強大，但有一些缺點，主要表現在3 個方面：

（1）在YAC載體的插入片段會出現缺失（deletion）和基因重排（rearrangement）現象。

（2）容易形成嵌合體。嵌合就是在單個YAC中的插入片段由2個或多個的獨立基因組片段連接組成。嵌合克隆約占總克隆的5-50%。

（3）YAC染色體與宿主細胞的染色體大小相近，影響了YAC載體的廣泛應用。YAC染色體一旦進入釀酒酵母細胞，由于其大小與內源的染色體的大小相近，就很難從中分離出來，不利于進一步分析。

但是YAC載體也具有一些突出的優(yōu)點：